Полный протокол для индуцированной анг ii модели гипертонии у мышей C57BL/6

Полный протокол для индуцированной анг ii модели гипертонии у мышей C57BL/6

Название: решение основных задач в моделировании гипертензии анг ii: комплексное решение от точной имплантации до динамического мониторинга

1. Введение

Гипертония и ее осложнения представляют собой глобальную проблему в области здравоохранения. Модель гипертонии, вызванная ангиотенсином II (Ang II), которая является краеугольным камнем доклинической модели для изучения системы ренин-ангиотенсин-альдостерон (RAAS) и связанных с ней целей, имеет решающее значение для успеха исследований. Тем не менее, широко распространены такие проблемы, как частота отказов более 50%, низкая послеоперационная выживаемость и нестабильные данные о артериальном давлении. Коренные причины часто кроются в упущенных из виду деталях точности выпуска наркотиков и хирургических травм. Эта статья предоставляет детальный, очень воспроизводимый протокол для создания индуцированной анг ii модели гипертонии у мышей C57BL/6, непосредственно решая эти болевые точки для повышения вашего экспериментального успеха.

I. справочная информация

Ангиотенсин II (англ II) — мощный вазоконстриктор в раас. Хроническое воздействие высоких концентраций анг II может вызвать ряд патофизиологических изменений, включая, в частности: гипертонию, регенерацию сердца и сосудов, окислительный стресс, воспалительные реакции, эндотелиальную дисфункцию и почечную травму. Таким образом, непрерывное подкожное вливание Ang II для создания гипертензивной модели животных стало классическим методом в исследованиях сердечно-сосудистой системы.

II. Положение в области прав человека Экспериментальная подготовка

Самцы C57BL/6 мышей, SPF класс, 8-10 недель, вес 25-30g. Акклиматизация не менее чем за неделю до процедуры.

Реагенты: ангиотенсин II (англ II), физраствор, изофлуран, повидень-йод, 75% этанола, депиляторный крем.

Оборудование и расходные материалы:

Оборудование: аппарат для анестезии животных с индукционной камерой, домотермической отопительной панелью, хирургической платформой, стерилизатором инструмента, холодным источником света, неинвазивной системой артериального давления хлыста.

Расходные материалы: Alzet® Osmotic Pump (модель 2004W или эквивалент, скорость 0,25 μL/h, продолжительность 28 дней), тонкие хирургические инструменты (ножницы, щипцы, гемостаты), зажимы для ран/прибора, вырезки волос, 0,22 μm стерильный фильтр, стерильные шприцы.

III. Положение в области прав человека Подробная экспериментальная процедура

Шаг 1: акклиматизация и базовое измерение (решающее значение!)

Цель: сведение к минимуму нагрузки в ходе измерений вр и получение надежных базовых данных.

Процедура: не менее 5-7 дней перед операцией, обрабатывать мышей ежедневно и акклиматизировать их к задней застежке удерживающего устройства. Измеряйте и регистрируйте стабильное систолическое кровяное давление (SBP) в течение не менее 3 последовательных дней в качестве базового значения.

Шаг 2: точный препарат (ключ к успеху)

Транспортное средство: для поддержания устойчивости Ang II используют в качестве транспортного средства уксусную кислоту-соленую (pH≈5.0) уксусной кислоты 0,01n. Добавить 0,57 мл ледяной уксусной кислоты (17,5 м) в 1 л соленой и смешивать. Только физраствор может служить средством контроля.

Расчет концентрации препарата (доза: 750 нг/кг/мин, насос: 2004вт):

Принцип: рассчитать на основе максимального веса тела в экспериментальной когорте, чтобы обеспечить достаточное дозирование для всех людей.

Известно: 2004W производительность насоса ≈ 0.25 μL/h, объем насоса ≈ 200 μL, продолжительность 28 дней.

Расчет: 1

Total Ang II required per hour per mouse = Max Body Weight (kg) × 750 (ng/kg/min) × 60 (min)

Ang II Stock обогащения = суммарная почасовая (нг)/производительность насоса (0,25 град/ч)

Total Ang II Required = концентрация запасов (ng/μL) × Pump Volume (μL) × Number of Mice (n)

Пример: для максимального веса 30 г (0,03 кг), ежечасно Ang II = 0,03 × 750 × 60 = 1350 нг. Требуемая концентрация = 1350 нг / 0,25 г/ч = 5400 г/г = 5,4 г/г. Общий объем препарата (для 10 мышей) ≈ 5.4 μg/μL × 200 μL × 10 = 10,8 мг.

Подготовка: фильтровать приготовленное Ang II решение через стерильный фильтр 0.22μm, aliquot, и хранить на -20°C.

Шаг 3: наполнение и заливка насоса (точность управления)

Взвешивание порожнего насоса: регистрируется первоначальный вес порожнего насоса (с модератором потока) (W1).

Асептическое наполнение: медленно вводить раствор препарата в насос через отверстие для наполнения с использованием стерильного шприца до появления капли на выходе, обеспечивая отсутствие пузырьков воздуха.

Насос для взвешивания: снова взвешивается (W2). Объем наполнения (W2 - W1) должен составлять > 90% номинального объема насоса. Если нет, пустые и наполненные.

Активация In Vitro (Priming): для обеспечения немедленного и стабильного выпуска после имплантации погрузить наполненный насос в стерильную соленовую жидкость при 37 градусах и инкубатор в течение 40-48 часов (модель 2004W). Этот шаг значительно повышает стабильность поставок на начальном этапе.

Шаг 4: подкожная операция по имплантации (минимально инвазивная техника)

Анестезия и подготовка: обезболивание мышей с помощью изофлурана. Брить мех между лопатками и дезинфицировать кожу поочередно йодом и алкоголем.

Разрез и тупая разделка: сделать поперечный разрез кожи размером ~1 см вдоль средней линии между лопатками. Используйте тупые щипцы, чтобы осторожно создать подкожный карман к animal&#- 39; Задние четвертины, достаточно большие, чтобы держать насос.

Имплантация насоса: вставить насос в карман с доставочным порталом, обращенным к хвостому (вдалеке от разреза).

Закрытие: закрыть надрез на коже с помощью зажимов или швов. Повторно дезинфицировать область вокруг разреза.

Этап 5: послеоперационный уход: критически важные 72 часа (повышение выживаемости)

Тепло: поместите мышку одну в клетку с чистым постельным бельем на 37 - градовой нагревательной панели или под тепловым светильником до полного пробуждения и перемещения.

Вспомогательный уход: при необходимости для предотвращения обезвоживания подкожно (например, 0,5 -1 мл) применять предварительно разогретый соленый раствор. Рассмотрим анальгетики (например, бупренорфин) для послеоперационного обезболивания.

Мониторинг: внимательно следите за мышцами#- 39; S поведение, питание/вода, и заживление ран по крайней мере в течение 3 дней.

Шаг 6: мониторинг артериального давления и сбор данных

Время: измерение давления 2-3 раза в неделю после операции.

Окружающая среда: измерения должны проводиться в тихой, теплой (~30 градусов), плохо освещенной комнате. Предварительно согреть мышку в удерживающей клетке под тепловой лампой в течение 15-20 минут для расширения хвостовых артерий.

Измерение: регистрируют 10-15 действительных показаний последовательно, выбрасывают выбросы и регистрируют среднее значение. Проводить измерения в одно и то же время каждый день (например, утром) для сведения к минимуму дневных колебаний.

IV. Проверка достоверности моделей и ожидаемые результаты

Кровяное давление: успешное моделирование, как правило, приводит к значительному увеличению ГБП в течение 3-7 дней, достигнув плато около недели 2, с подъёмом 20-60 ММHG над исходным уровнем.

Конечные анализы (факультативно):

Вес органа: при прекращении операции, органы жатвы (сердце, аорта, почки). Расчет массы органа/длины голени или соотношения массы тела. Ожидаемые результаты включают гипертрофию сердца.

Гистология: пятна H&E, Masson&#- 39; Трихром s и т.д., может выявить патологии, такие как гипертрофия кардиомиоцитов, утолщение стенок сосудов, и осаждение коллагена (фиброз).

Молекулярная биология: упрегуляция генов, связанных с гипертрофией, фиброзом и воспалением (например, ANP, BNP, Collagen I/III, TNF-α) может быть обнаружена в сердце, сосудах и почках тканей.

Iii. Выводы и рекомендации

Строго соблюдая этот протокол, уделяя особое внимание точной разработке лекарственных средств, правильному нагнетанию насосов, скрупулезной минимально инвазивной хирургии и тщательному послеоперационному уходу, исследователи могут эффективно преодолеть основные проблемы, связанные с низкой воспроизводимостью и низкими показателями выживаемости при моделировании гипертонии, вызываемой анг ii, создавая тем самым стабильную и надежную основу для исследований сердечно-сосудистой системы на основе моделей животных.

Для получения более подробной информации о ветеринарных решениях посетите наш официальный сайт: www.okclevervet.com